柑桔酸性转化酶基因家族成员的克隆及特性分析

编号 zgly0001288352

文献类型 期刊论文

文献题名 柑桔酸性转化酶基因家族成员的克隆及特性分析

作者 安新民  张上隆  徐昌杰  陶俊 

作者单位 浙江大学  扬州大学 杭州310029  杭州310029  扬州225014 

母体文献 林业科学 

年卷期 2004年04期

年份 2004 

分类号 Q785 

关键词 柑桔  酸性转化酶  基因家族  克隆  特性 

文摘内容 分析植物液泡和细胞壁酸性转化酶基因的保守区序列 ,设计 2对PCR引物 ,以温州蜜柑基因组DNA为模板 ,采用PCR方法扩增出长分别为 74 1bp(A)和 5 2 4bp(B)的 2个DNA片段 ,克隆入pUCm T载体测序 ,序列已在GenBank中登记 (登记号分别为AY0 2 94 81和AF332 881)。在GenBank中进行同源性检索 ,结果表明片段A编码的氨基酸与植物液泡酸性转化酶同源性较高 ,与胡萝卜、马铃薯和番茄同源性分别为 79%、79%和 78%。片段B编码的氨基酸序列与草莓、拟南芥和豌豆细胞壁转化酶同源性分别为 78%、78%和 77%。推测A和B分别定位于液泡和细胞壁。运用Clustalx和Bioedit软件包对已获得的柑桔转化酶基因家族的 7个基因序列进行分析 ,结果表明 7个基因分属转化酶基因家族的 4种类型。推测A和B为 2个新成员 ,分别属于柑桔液泡酸性转化酶基因Ⅱ型(CUAI2 )和细胞壁酸性转化酶基因Ⅱ型 (CUCWI)。Southern杂交结果表明 ,CUCWI和CSCWI 2个探针有时会出现较弱的杂交干扰信号 ,可采用CSCWI与CUCWI同源性较低的另一段序列制作探针进行杂交 ,也可通过缩短杂交时间、提高杂交和洗膜的温度以及降低洗膜SSC的浓度等措施来降低 ;其它成员之间无干扰信号产生