用于青枯劳尔氏菌快速检测的靶标内切葡聚糖酶抗体制备与检测试验

编号 zgly0001515673

文献类型 期刊论文

文献题名 用于青枯劳尔氏菌快速检测的靶标内切葡聚糖酶抗体制备与检测试验

作者 白利叶  范晓东  周泽扬  王林玲 

作者单位 重庆师范大学生命科学学院  西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S888.71 

关键词 桑青枯病  青枯劳尔氏菌  胶体金免疫层析  内切葡聚糖酶  多克隆抗体  检测靶标 

文摘内容 桑青枯病是一种土传性细菌病害,其病原为青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)。内切葡聚糖酶(EGL)是青枯劳尔氏菌在胞内合成后分泌、吸附于细胞壁周围的一个重要毒力因子,研究以其为靶标的桑青枯病快速检测诊断技术,可以为病害防控提供技术支持。从青枯劳尔氏菌G12-50菌株中克隆了egl基因,将青枯劳尔氏菌与土壤常见的4种细菌以及植物常见的4种病原细菌的内切葡聚糖酶进行氨基酸序列多重比对,其同源性较低。构建重组质粒p ET32a-EGL转化大肠杆菌BL21融合表达EGL蛋白,制备的抗EGL多克隆抗体经ELISA检测其效价达1∶20 000,Western blot分析亦呈现单一的特异性条带。用制备的抗体对培养的青枯劳尔氏菌G12-50菌液和感染桑青枯病的桑茎汁液进行Western blot检测,结果出现明显的特异性条带,而对照大肠杆菌则没有出现条带。研究结果表明,青枯劳尔氏菌的内切葡聚糖酶可以作为桑青枯病早期检测诊断的病原靶标,直接应用于对桑园土壤和桑树样品的快速检测。