小麦Ra3基因编码区的克隆、原核表达及纯化

编号 zgly0001392940

文献类型 期刊论文

文献题名 小麦Ra3基因编码区的克隆、原核表达及纯化

作者 杨宇衡  赵金阳  唐如春  魏少华  范三红 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院  西北农林科技大学陕西省农业分子生物学重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年03期

年份 2010 

分类号 S512.032 

关键词 小麦  ramosa3  同源克隆  重组表达  亲和纯化 

文摘内容 【目的】克隆小麦ramosa3(Ra3)基因完整编码区,利用原核表达系统表达并纯化获得重组的小麦RAMOSA3(RA3)。【方法】利用RT-PCR技术,从普通小麦中国春幼穗中扩增小麦Ra3,将其重组到原核表达载体pET-41a,并在T7Express competentE.coli菌株中进行诱导表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并通过Western印迹技术对其进行鉴定。【结果】获得了长度为1080bp的cDNA片段,该片段包含小麦Ra3完整编码区,编码产物长度为360个氨基酸残基,属于TPP酶家族成员;SDS-PAGE结果显示,菌体总蛋白中出现约66ku的预期条带,其表达量占总蛋白的44.6%;抽提液中加入体积分数0.3%的Triton X-100,可显著提高重组蛋白的溶解度;纯化后的重组蛋白呈单点纯,Western印迹结果进一步确证其为目标蛋白。【结论】利用原核系统高效表达并纯化获得了重组的小麦RA3。