黄粉甲抗冻蛋白AFP84a在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

编号 zgly0001381499

文献类型 期刊论文

文献题名 黄粉甲抗冻蛋白AFP84a在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

作者 闫清华  杨理  邵强 

作者单位 新乡医学院生命科学技术系  河南科技学院实验中心  河南师范大学生命科学学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2010年11期

年份 2010 

分类号 Q966 

关键词 黄粉甲  大肠杆菌  抗冻蛋白  融合表达  亲和纯化  抗冻活性 

文摘内容 为表达和纯化黄粉甲Tenebrio molitor抗冻蛋白,采用RT-PCR方法扩增得到黄粉甲抗冻蛋白基因afp84acDNA,将其连接到pMAL-p2X质粒上,构建分泌型融合表达载体pMAL-p2X-afp84a,并在大肠杆菌Escherichia coli TBI中表达;进一步利用Amylose柱亲和纯化出该重组蛋白,后利用细菌抗寒性检测重组蛋白的生物活性。。结果显示:融合蛋白含量占总可溶蛋白的40%。SDS-PAGE分析表明,用MgSO4处理法与超声波细胞破碎法均可使融合蛋白从细胞中释放;融合蛋白经Amylose柱亲和纯化,FactorXa因子酶切,电泳显示获得的目的蛋白呈单一条带。细菌抗寒性检测表明该重组蛋白具有较高的抗冻活性。黄粉甲抗冻蛋白基因afp84acDNA的克隆、原核表达为进一步研究抗冻蛋白的性质和应用提供了有用的实验材料。