罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达

编号 zgly0001459682

文献类型 期刊论文

文献题名 罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达

作者 邢爱佳  马小军  莫长明  潘丽梅  韦鹏霄  唐春风  唐其 

作者单位 广西大学农学院  中国医学科学院药用植物研究所  广西壮族自治区药用植物园  广西药用资源保护与遗传改良重点实验室 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2013年06期

年份 2013 

分类号 S668.9 

关键词 罗汉果  葡萄糖基转移酶  RACE  原核表达  融合蛋白 

文摘内容 从罗汉果(Siraitia grosvenorii)转录组中获得一条与罗汉果甜苷Ⅴ生物合成相关的葡萄糖基转移酶(UDPG)的unigene片段,以罗汉果授粉后70d的果实RNA为模板,利用RACE和RT-PCR技术克隆UDPG全长基因,将克隆得到的SgUDPG1基因连接到原核表达载体pEASY-E1上,构建融合表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,重组蛋白纯化,SDS-PAGE检测表达产物以及Western-blotting和质谱鉴定蛋白产物。结果表明,获得了1条SgUDPG1,全长为1959bp,开放阅读框ORF为1365bp,编码1条454aa的肽链,理论分子量为51.2kD,等电点为5.39,具有植物中次生代谢产物糖基转移酶特有的保守结构域PSPG-boxmotif。SgUDPG1在授粉后50d和70d的果实中表达逐渐升高,是对照授粉后3d的5.16倍和13.12倍,与果实中甜苷Ⅴ含量呈相同趋势。此基因的ORF可以在大肠杆菌中表达,并且可以纯化出比理论分子量大5.3kD的融合蛋白,通过Western-blotting和质谱鉴定,确定该蛋白属于罗汉果葡萄糖基转移酶。