棉铃虫蜕皮调节转录因子在大肠杆菌中的重组表达及其包涵体纯化

编号 zgly0001288399

文献类型 期刊论文

文献题名 棉铃虫蜕皮调节转录因子在大肠杆菌中的重组表达及其包涵体纯化

作者 赵小凡  蒋晓娟  徐筠娉  刘延荷  王金星 

作者单位 山东大学生命科学学院  山东大学生命科学学院 济南250100  济南250100  济南250100 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2004年03期

年份 2004 

分类号 Q786 

关键词 棉铃虫  蜕皮调节转录因子  重组表达  包涵体纯化  抗体制备 

文摘内容 蜕皮调节转录因子 （hormonereceptor 3,HR3）在昆虫蜕皮过程中启动蜕皮相关早期基因簇表达 ,并抑制蜕皮相关晚期基因簇表达 ,对昆虫蜕皮级联反应起着关键的调控作用。利用合成的特异性引物通过RTPCR扩增了棉铃虫Helicoverpaarmigera蜕皮调节转录因子 （HHR3） ,并与pGEX4T1载体连接 ,在大肠杆菌EscherichiacoliDH5α内进行扩增 ,经过PCR筛选获得了HHR3pGEX4T1重组质粒。用该质粒转化大肠杆菌表达菌株BL2 1并进行诱导表达 ,获得了与谷胱甘肽S转移酶 （GST）融合表达的HHR3包涵体 ,分子量在 94kD左右 ,通过无离子去垢剂CAPS（3[cyclohexylamino]1propanesulfonicacid）变性、复性后获得了可溶性GSTHHR3融合蛋白 ,经凝血酶裂解和SDSPAGE分离得到纯化的HHR3,经蛋白质N端测序确认表达正确。用重组表达的HHR3免疫家兔 ,制备了兔抗HHR3多克隆抗体 ,免疫印迹检测显示该抗体对HHR3有特异性识别能力 ,可以用于HHR3功能与调控等下游研究。免疫印迹检测结果还表明 ,HHR3在 5龄向 6龄蜕皮的幼虫脂肪体中高表达 ,在进入 6龄 2 4h的幼虫脂肪体中含量明显下降 ,在 6龄 72h的幼虫中肠中没有检测到HHR3表达 ;成虫卵巢中有HHR3表达。