苹果木葡聚糖酶抑制蛋白基因的克隆与表达分析

编号 zgly0001645332

文献类型 期刊论文

文献题名 苹果木葡聚糖酶抑制蛋白基因的克隆与表达分析

作者 李婷  吴成成  李保华  练森  梁文星  王彩霞 

作者单位 青岛农业大学植物医学学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室山东省应用真菌重点实验室 

母体文献 植物生理学报 

年卷期 2018年07期

年份 2018 

分类号 S436.611 

关键词 苹果  木葡聚糖酶抑制蛋白基因  克隆  生物信息学分析  表达分析 

文摘内容 以‘富士’苹果(Malus pumila)树皮总RNA为模版,利用RT-PCR技术克隆木葡聚糖酶抑制蛋白基因,命名为Mp XEGIP1。通过生物信息学软件对基因c DNA序列、系统进化关系及理化性质进行分析,采用荧光定量PCR技术测定Mp XEGIP1的表达量。构建原核表达载体p ET-Mp XEGIP1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),利用SDSPAGE和western blot检测和验证融合蛋白的表达。结果表明,获得了Mp XEGIP1的全长c DNA序列(登录号MG515243),开放阅读框1 344 bp,编码447个氨基酸。Mp XEGIP1编码蛋白的理论分子量约48.77 k Da,为亲水的不稳定蛋白;57~419位氨基酸为木聚糖酶抑制蛋白保守域。序列多重比对及系统进化树分析表明,Mp XEGIP1编码氨基酸序列与‘金冠’苹果XEGIP完全一致,其次与梨XEGIP序列相似性81%,三者亲缘关系较近。‘富士’枝条接种腐烂病菌后,Mp XEGIP1显著上调表达。原核表达和western blot分析表明,该蛋白以包涵体形式存在,能与HIS抗体特异性结合,证实Mp XEGIP1编码蛋白得到成功表达。