均匀设计优化建兰ISSR-PCR体系

编号 zgly0000505041

文献类型 期刊论文

文献题名 均匀设计优化建兰ISSR-PCR体系

作者 胡薇  黄儒珠  孙端  饶春荣  李锦凤 

作者单位 福建师范大学生命科学学院  福建省林业检查总站  连城县朋口镇福建兰花基地  中国兰协建兰样品园  福建农林大学林学院 

母体文献 生命科学研究 

年卷期 2007,11(1)

页码 58-63

年份 2007 

分类号 Q949.662 

关键词 建兰  ISSR-PCR  均匀设计 

文摘内容 采用均匀设计, 对影响建兰ISSR-PCR体系的引物、Mg^2+、dNTP和Taq DNA聚合酶浓度等进行4因素5水平和4因素3水平两轮优化, 建立了适合于建兰ISSR-PCR的反应体系: 在20μL反应体系中, 舍引物0.25μmol/L、Mg^2+ 2.5mmol/L, dNTP0.2mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U和模板DNA40ng.在此基础上对扩增程序中的循环次数和退火温度, 以及ISSR引物进行筛选。筛选获得的扩增程序为: 94℃预变性5min; 接着进行32个循环: 94℃变性35S, 52～56℃退火45S, 72℃延伸90s; 循环结束后, 72℃延伸10min.同时筛选得到14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。