编号
zgly0000879960
文献类型
期刊论文
文献题名
应用均匀设计优化文冠果ISSR-PCR反应体系
作者单位
山西农业大学林学院
母体文献
山西农业大学学报;自然科学版
年卷期
2014(3)
页码
241-244+248
年份
2014
关键词
文冠果
ISSR-PCR
均匀设计
文摘内容
采用均匀设计,对引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度4个因素分别设置5个水平,对文冠果ISSR-PCR反应体系进行优化,在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测,构建了文冠果ISSR-PCR优化反应体系,在20μL ISSR-PCR反应体系中,各因素的最佳浓度分别为:2×PCR buffer、0.2mmol·L-1 dNTP、0.3μmol·L-1引物、2.5mmol·L-1 Mg2+和0.4UTaqDNA聚合酶,进一步对扩增程序中的循环次数和退火温度,以及ISSR引物进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性5min。