基于高分辨熔解分析的cry1I类基因的克隆、表达及活性分析

编号 zgly0001447641

文献类型 期刊论文

文献题名 基于高分辨熔解分析的cry1I类基因的克隆、表达及活性分析

作者 赵灿  张春鸽  束长龙  孙冰  宋福平  高继国  张杰 

作者单位 东北农业大学生命科学院  中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室 

母体文献 中国生物防治学报 

年卷期 2013年01期

年份 2013 

分类号 S476.11 

关键词 苏云金芽胞杆菌  高分辨熔解分析  cry1I  克隆  杀虫活性 

文摘内容 本研究将高分辨熔解分析(high resolution melting assay,HRMA)的方法应用于cry1I类基因的分型。根据已报道的cry1I类基因的保守区设计一对扩增片段为131 bp的通用鉴定引物,利用高分辨熔点仪对产物的熔解曲线进行分析。利用此方法对本实验室保存的标准菌株HD-12进行了cry1I类基因的鉴定,克隆到2个新型的cry1Ib和cry1Id基因,被Bt国际命名委员会分别正式命名为cry1Ib11和cry1Id2。这两种基因在E.coli Rosetta菌株中能正常表达81 kDa的蛋白。Cry1Ib11和Cry1Id2蛋白对小菜蛾Plutellaxylostella二龄幼虫和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis初孵幼虫具有显著的杀虫活性,LC50分别为6.13μg.mL 1和6.10μg.mL 1及11.18μg.mL 1和1.43μg.mL 1。但对甜菜夜蛾Spodoptera exigua及鞘翅目的大猿叶甲Colaphellus bowringi均没有明显毒杀作用。高分辨溶解分析法为新型cry基因的快速、准确鉴定提供了有效的工具。