三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选

编号 zgly0000795580

文献类型 期刊论文

文献题名 三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 高寰  张铮  周婷  曹向然  陈阳洋  王喆之 

作者单位 陕西师范大学生命科学学院  陕西师范大学药用资源与天然药物化学教育部重点实验室 

母体文献 中草药 

年卷期 2012,43(3)

页码 572-576

年份 2012 

分类号 R282.12 

关键词 三叶木通  MSAP  遗传多样性  体系优化  引物筛选  酶切反应 

文摘内容 目的研究三叶木通表观遗传多样性,建立并优化三叶木通甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplifiedpolymorphism,MSAP)反应体系。方法以三叶木通叶片为材料,利用正交试验建立三叶木通MSAP的预扩增和选择性扩增的最佳反应体系。结果建立的MSAP最佳反应体系为酶切反应: HpaII/MspI 10 U,EcoR I 10 U;预扩增反应: 总体积20μL,连接产物2μL,E00、HM00各125 ng,dNTPs 0.312 5 mmol/L,Mg2+1.875 mmol/L,Taq DNA聚合酶2 U;选择性扩增反应: 总体积20μL,稀释200倍的预扩增产物5μL,引物E-ACT、HM-CAT各50 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+1.250mmol/L,Taq DNA酶1 U。利用优化的体系,最终从MSAP的80对引物中筛选出有效引物6对。结论建立的MSAP反应体系可用于后续三叶木通DNA甲基化的相关研究。