利玛原甲藻中聚酮合酶基因克隆与分析

编号 zgly0001370806

文献类型 期刊论文

文献题名 利玛原甲藻中聚酮合酶基因克隆与分析

作者 汤敬谦  李挺  杨维东  刘洁生  李宏业 

作者单位 暨南大学生物工程学系  广东省微生物研究所  水体富营养化与赤潮防治广东省高等学校重点实验室 

母体文献 生态学报 

年卷期 2009年05期

年份 2009 

分类号 Q943.2 

关键词 利玛原甲藻  聚酮合酶  基因克隆  分子杂交 

文摘内容 为探讨聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因与藻毒素合成的关系,揭示PKS基因在赤潮毒素合成中的作用,采用兼并引物,通过PCR技术获得利玛原甲藻(Prorocentrum lima)可能存在的I型PKS基因;并对所获得PKS基因的同源性进行了分析,构建了基于PKS氨基酸序列的系统进化树;采用RT-PCR技术分析了PKS基因在利玛原甲藻中的表达状况;并通过多聚腺苷酸RNA的扩增、细菌的分离鉴定、限制性内切酶酶切、Southern blotting等技术对PKS基因进行了分析。结果表明,利玛原甲藻中PKS基因与海洋原甲藻聚为一支,在利玛原甲藻中有显著表达;以Oligo(T)引物进行RT-PCR扩增时,可出现18S rRNA和PKS基因相应条带;限制性内切酶酶切和Southern blotting结果显示,该基因中存在明显的甲基化;16S rRNA基因序列分析显示,从利玛原甲藻培养液中分离到的细菌与海洋放线菌假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)基因序列同源性达到99%,该菌株中并不存在PKS基因。结果显示,所获得的PKS基因是利玛原甲藻聚酮合酶基因,基因序列已提交GenBank(EF521601);PKS可能在腹泻性贝毒合成中起着关键作用。