741杨双Bt基因的遗传转化及转基因株系的抗虫性

编号 zgly0000803447

文献类型 期刊论文

文献题名 741杨双Bt基因的遗传转化及转基因株系的抗虫性

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王桂英  杨敏生  霍雪梅  王艳平  李珊珊 

作者单位 河北农业大学林学院林业生物实验室保定071001  廊坊市农林科学院廊坊065000 

母体文献 林业科学 

年卷期 2012(9)

页码 42-49

年份 2012 

分类号 S718.46 S722.36 

关键词 载体构建  Cry1Ac基因  Cry3Aa基因  双Bt741杨  抗虫性 

文摘内容 以含有Cry3Aa基因的重组质粒pBCC3为基础,利用PCR和DNA重组技术,从pBCC3中克隆出抗虫基因Cry3Aa,将其正向插入载体pCAMBIA1305的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成pCAMBIA1305-Cry3Aa植物表达载体,并导入根癌农杆菌EHA105。采用农杆菌介导的遗传转化法,将Cry3Aa基因转入已转Cry1Ac+API基因的741毛白杨无性系pB29中,获得转双Bt基因的741杨。在含潮霉素的培养基中进行多次继代筛选,获得抗性稳定的无性系9个,编号为pCCA1—pCCA9。采用特异引物分别对转基因植株进行PCR检测,结果显示Cry1Ac基因稳定存在于pB29中,Cry3Aa基因已整合到各无性系的基因组DNA中。ELISA毒蛋白检测,转基因株系都有Cry1Ac和Cry3Aa杀虫蛋白表达。用转基因植株叶片进行柳蓝叶甲(鞘翅目)和美国白蛾(鳞翅目)室内饲虫试验结果表明,转基因植株具有双抗性。根据对测试昆虫的致死率划分高中低3个抗性水平,其中pCCA2,pCCA5,pCCA6,pCCA9具有双高抗;pCCA3,pCCA4和pCCA7对柳蓝叶甲表现出中、低抗性,对美国白蛾则高抗;而pCCA1表现对美国白蛾的极低抗性,对柳蓝叶甲则高抗。