苹果ACO1转录因子MdHB-1基因的克隆及其真核表达载体的构建

编号 zgly0001435556

文献类型 期刊论文

文献题名 苹果ACO1转录因子MdHB-1基因的克隆及其真核表达载体的构建

作者 于巧平  尹明安  任小林  姜永华 

作者单位 西北农林科技大学园艺学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2012年10期

年份 2012 

分类号 S661.1 

关键词 苹果  花器  转录因子MdHB-1  克隆  真核表达载体 

文摘内容 【目的】通过生物信息学分析,将苹果的一段EST序列初步定性为转录因子MdHB-1基因,对该基因进行克隆和真核表达载体构建,为进一步研究其分子生物学功能奠定基础。【方法】根据番茄LeACO1转录因子LeHB-1的基因序列,对苹果EST库进行Blast,获得一段EST序列,根据该EST序列设计1对特异性引物,以皇家嘎啦苹果花器总RNA为材料,经RT-PCR得到1条长约1 000bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定及分析。将基因MdHB-1与真核表达载体pPICZA连接,构建真核表达载体pPICZA-MdHB-1,并导入毕赤酵母菌种GS115,通过PCR鉴定该载体的导入情况。【结果】克隆到苹果MdHB-1基因(GenBank登录号为JQ678788),其开放阅读框为1 011bp,编码336个氨基酸。Blastn和Blastp序列比对分析发现,MdHB-1与已登录的其他物种的HB-1基因相似性达50%～60%。该基因编码的氨基酸中存在保守序列HD-Zip结构域,该保守序列与已经报道的番茄LeHB-1、拟南芥AtHB-1的保守序列的同源性均大于85%。重组表达载体PICZA-MdHB-1构建正确并已成功导入酵母基因组中。【结论】成功克隆了苹果转录因子MdHB-1基因全长,并正确构建了其真核表达载体。