新疆褐牛CD46基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

编号 zgly0001555042

文献类型 期刊论文

文献题名 新疆褐牛CD46基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者 木哈买提江·铁格斯  张慧敏  杜润慈  加尔肯  苏战强  冉多良  刘建华 

作者单位 新疆农业大学动物医学学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2017年08期

年份 2017 

分类号 S823 

关键词 新疆褐牛  CD46  表达  融合蛋白  多克隆抗体 

文摘内容 旨在克隆并表达新疆褐牛CD46基因,制备其多克隆抗体,为进一步研究牛CD46分子生物学功能奠定基础。采用RT-PCR方法从新疆褐牛脾脏中扩增CD46基因全长,进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析,将CD46部分序列亚克隆于pET-28a(+)和pVAX1载体中。将阳性重组质粒pET-28a-△CD46转化于E.coli Rosetta-gamiB(DE3)感受态细胞,诱导表达截短CD46蛋白。用切胶纯化的His-△CD46融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;采用ELISA测定多克隆抗体的效价;取无内毒素重组质粒pVAX1-△CD46转入BHK-21(仓鼠肾细胞)细胞,表达产物以制备的多克隆抗体为一抗,采用Western blot法检测该多克隆抗体的特异性。CD46基因的测序结果表明,部分基因蛋白表达、纯化条带大小与预期一致;制备的抗牛CD46多克隆抗体效价高于1∶128 000,并具有良好的特异性。