猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化

编号 zgly0001289948

文献类型 期刊论文

文献题名 猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化

作者 张锐  孙美榕  张红莲  杨捷  黄燕  陈绍红  杜慧  欧阳红生 

作者单位 湛江海洋大学现代生化中心  深圳科安信公司  中国人民解放军军需大学生物化学与分子生物学教研室 广东湛江524088  广东深圳518057  广东湛江524088  吉林长春130062 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2004年09期

年份 2004 

分类号 S828 

关键词 猪肌生成抑制素基因  成熟蛋白编码序列  表达  纯化 

文摘内容 猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA在去除信号肽后,对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆,并测序分析,结果表明其与设计序列完全一致。将该克隆载体的质粒DNA用带有BamH 和Sal 内切酶识别序列的另1对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kbPCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体。对成功构建的表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,表达的MSTN分子质量为41.4513ku。因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92.5%。