一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株构建及应用

编号 zgly0001447899

文献类型 期刊论文

文献题名 一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株构建及应用

作者 陈和  陈琴  梅文枫  钱月忠  聂作明  于威  陈健  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生命科学学院  浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2013年03期

年份 2013 

分类号 Q785 

关键词 红色荧光蛋白  家蚕卵巢上皮细胞  家蚕核型多角体病毒  病毒滴度  稳定转化 

文摘内容 构建一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株,用于检测细胞是否被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染和快速、便捷地测定BmNPV滴度。首先构建BmNPV多角体蛋白基因(polh)启动子驱动的红色荧光蛋白基因(DsRed)表达盒,然后将该表达盒克隆至pIZT/V5-His中构建稳定转化载体pIZT-DsRed并转染家蚕卵巢上皮细胞BmN,经过终浓度为300μg/mL的博莱霉素(zeocin)筛选3个月后,最终获得DsRed稳定转化的家蚕细胞株BmN-RFP。当该细胞株感染BmNPV后,由于病毒晚期表达因子的活化引发polh启动子控制的DsRed表达,在荧光显微镜下可以观察到感染病毒的细胞发出红色荧光,因而BmN-RFP可用来指示BmNPV的感染。利用BmN-RFP细胞株,采用终点稀释法仅用3 d时间即可完成BmNPV滴度的测定。