百合斑驳病毒CP与CI基因的融合表达、多抗制备及其应用

编号 zgly0001380443

文献类型 期刊论文

文献题名 百合斑驳病毒CP与CI基因的融合表达、多抗制备及其应用

作者 童勋章  王亚军  谢忠奎  张玉宝  安丽萍  郭志鸿  郭芳 

作者单位 中科院寒区旱区环境与工程研究所皋兰生态与农业综合试验站  中科院寒区旱区环境与工程研究所极端环境生物抗逆特性与生物技术实验室 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S436.8 

关键词 百合斑驳病毒  外壳蛋白  细胞质内含体  抗体  DAS-ELISA  病毒检测 

文摘内容 采用RT-PCR方法从甘肃地区引种的切花百合上克隆了百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因与细胞质内含体(cytoplasmic inclusions,CI)基因的3′端600 bp片段,连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了融合表达的重组质粒pET-28a-CP-CI200。重组质粒转化大肠杆菌BL21成功表达了融合蛋白CP-CI200。经镍柱亲和层析获得纯化的融合蛋白,进一步用其免疫家兔制备了多克隆抗体。Western Blot结果显示,该多抗与感染LMoV的百合叶片中的病毒CP与CI均发生特异性反应,而对健康百合叶片无反应。用该多抗建立双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测百合叶片样品,相对于RT-PCR方法其灵敏度和特异性均达到了93.3%。研究结果为快速、准确检测百合斑驳病毒的试剂盒研制奠定了基础。