中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA的克隆及原核表达

编号 zgly0000564648

文献类型 期刊论文

文献题名 中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA的克隆及原核表达

学科分类 220.3020;森林昆虫学

作者 李红亮  聂文敏  高其康  程家安 

作者单位 中国计量学院生命科学学院  浙江大学昆虫科学研究所 

母体文献 中国农业科学 

年卷期 2008,41(3)

页码 933-938

年份 2008 

分类号 Q966  Q78 

关键词 中华蜜蜂  工蜂触角  气味结合蛋白  原核表达 

文摘内容 【目的】克隆、分析和原核表达编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2的cDNA。【方法】以13个不同日龄中华蜜蜂工蜂触角为材料，通过RT-PCR技术以获得编码中华蜜蜂Apis cerana cerana气味结合蛋白ASP2基因成熟蛋白开放阅读框序列，并在pET-30a(＋)/BL21(DE3)系统中进行原核表达。【结果】克隆了命名为Acer-ASP2(GenBank登录号：DQ449667)的中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2基因，该序列全长429bp，编码142个氨基酸残基，预测分子量和等电点分别为15.7kD和4.36。预测蛋白具有昆虫气味结合蛋白典型的6个保守的半胱氨酸残基的特征，进一步分析表明Acer-ASP2极有可能属于GOBP家族。构建的原核表达载体pET/Acer-ASP2，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出一个分子量约为21kD的融合蛋白，融合蛋白大部分以包涵体的形式存在于菌体沉淀中(约59.7%)，经洗涤和尿素梯度溶解对包涵体进行了纯化，经凝胶光密度扫描分析，约占最终产物的81.2％左右。【结论】克隆、分析和表达了一个新的编码中华蜜蜂气味结合蛋白ASP2 cDNA序列，为进一步研究其分子结构和功能奠定了基础。