绿色木霉纤维素酶CBHII基因的分子克隆

编号 zgly0001146364

文献类型 期刊论文

文献题名 绿色木霉纤维素酶CBHII基因的分子克隆

作者 王建荣  张曼夫 

作者单位 上海市农业科学院畜牧兽医研究所  北京农业大学生物学院 上海 200030  北京 100094 

母体文献 真菌学报 

年卷期 1994年03期

年份 1994 

分类号 Q943 

关键词 木霉  纤维二糖水解酶  基因文库  分子杂交  克隆 

文摘内容 本文以噬菌体lambda EMBL3 DNA为载体,通过克隆绿色木酶(Trichoderma viride)高分子量基因组DNA的部分酶解片段,并将重组分子进行体外包装后侵染Escherichia.coli K802,由此构建了绿色木霉基因文库。以李氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶CBHII基因的末端片段为探针,用轮迥噬菌斑原位杂交从文库中筛选出CBHII基因的阳性克隆5个,随机取其中3个克隆用上述探针作斑点杂交,结果进一步证明克隆了全长或近全长的绿色木霉CBHII基因,用李氏木霉CBHI基因的末端片段探针作斑点杂交,结果提示CBHI与CBHII基因的末端序列之间无同源性存在。从斑点杂交的阳性克隆中提取DNA,酶切鉴定插入片段的长度,并克隆于质粒pUC19,Southern杂交结果证明获得了含绿色木霉CBHII基因的重组质粒pCBHII-14。