拟南芥SSR检测体系的优化

编号 zgly0001375853

文献类型 期刊论文

文献题名 拟南芥SSR检测体系的优化

作者 高海荣  钟鸣  刘宛  李培军  王磊  周启星 

作者单位 沈阳农业大学辽宁省农业生物技术重点实验室  中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程重点实验室 

母体文献 生态学杂志 

年卷期 2010年02期

年份 2010 

分类号 Q943.2 

关键词 拟南芥  SSR  体系优化  凝胶电泳 

文摘内容 以拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼苗为实验材料,采用单因素筛选法及L16(45)正交实验方法,对简单序列重复(SSR)技术中聚合酶链式反应(PCR)组分、扩增程序、电泳检测等环节进行优化。优化25μl反应体系为:1×PCR Buffer、20ng模板DNA、1.5mmol.L-1Mg2+、0.3μmol·L-1引物、150μmol·L-1dNTPs和1.0U Taq DNA聚合酶。扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸45s,共30个循环,72℃延伸10min。用非变性聚丙烯酰胺凝胶(EB染色)电泳检测并取得较好效果。利用该体系进行扩增,所得谱带清晰、稳定、非特异性带少。