秦岭大熊猫IFN-γ基因的表达及其生物活性分析

编号 zgly0001354350

文献类型 期刊论文

文献题名 秦岭大熊猫IFN-γ基因的表达及其生物活性分析

作者 朱辉  马清义  乔琪  朱小甫  陈德坤 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心  咸阳职业技术学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2009年12期

年份 2009 

分类号 S852.4 

关键词 秦岭大熊猫  IFN-γ基因  基因表达  生物活性 

文摘内容 【目的】探讨大熊猫秦岭种群和四川种群IFN-γ基因的差异,获得具有生物活性的秦岭大熊猫重组γ干扰素蛋白。【方法】采集秦岭大熊猫血样,采用RT-nested PCR技术扩增秦岭大熊猫IFN-γ基因,将其克隆到表达载体pET32a中,转入DH-5α,进行菌液PCR和双酶切鉴定,经序列测定与分析,构建表达质粒pET32a-IFN-γ,将其转入BL21(DE3)受体菌后,用IPTG诱导表达秦岭大熊猫IFN-γ蛋白。对重组IFN-γ蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析后,用镍柱亲和层析纯化可溶性蛋白。采用淋巴细胞增殖试验检测重组IFN-γ的活性。【结果】大熊猫秦岭种群和四川种群的IFN-γ基因序列在434位核苷酸处存在差异,秦岭大熊猫的为G,而四川大熊猫的为C;氨基酸序列相同。重组IFN-γ主要以可溶性形式存在,其分子质量为35.3 ku,约占菌体总蛋白的20%;纯化的可溶性蛋白经SDS-PAGE分析,纯度可达90%以上;重组IFN-γ具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性。【结论】获得的重组IFN-γ蛋白表达量高且具有生物学活性。