猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备与特性分析

编号 zgly0001349560

文献类型 期刊论文

文献题名 猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备与特性分析

作者 陈仕龙  林天龙  陈少莺  庄向生  王隆柏  魏宏  周伦江  车勇良  黄梅清 

作者单位 福建省农业科学院畜牧兽医研究所  福建省农业科学院生物技术研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2008年08期

年份 2008 

分类号 S858.28 

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒  单克隆抗体  酶联免疫吸附试验  免疫荧光试验  Westernblot 

文摘内容 【目的】制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体,探讨单克隆抗体临床应用的价值及病毒蛋白的结构和功能。【方法】采用差速和蔗糖不连续密度梯度离心纯化的PRRSV抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞常规融合,经间接ELISA的筛选和有限稀释亚克隆,获得能稳定分泌鼠抗PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA、Western blot和免疫荧光试验等方法分析其特性。【结果】成功地获得了3株稳定分泌抗PRRSV-GP5蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为A61、B47和C65。这3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1、IgG3和IgG1,均具有ELISA、IFA和Western blot特性,细胞上清液和腹水的ELISA抗体效价分别为1×27~1×28和1×105~1×106。特异性测定结果表明,3株单克隆抗体与Marc-145细胞、猪2型圆环病毒和猪细小病毒均无交叉反应。Western blot测定结果表明,3株单克隆抗体均能特异性识别PRRSV-GP5蛋白。【结论】获得了特异性识别PRRSV-GP5蛋白的单克隆抗体,为PRRS免疫诊断试剂盒的研制奠定了基础。