海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库的构建

编号 zgly0000601525

文献类型 期刊论文

文献题名 海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库的构建

作者 申明霞  刘涛  杜丽  王凤阳  成鹰  许世英  吴科榜  李治深  符运南  林贤梅  满初日嘎  祁超 

作者单位 华中师范大学生命科学学院  海南大学农学院  海南大田国家级自然保护区 

母体文献 生物技术 

年卷期 2008,18(2)

页码 5-8

年份 2008 

分类号 Q785 

关键词 海南坡鹿  外周血白细胞  cDNA文库  SMART技术 

文摘内容 目的：构建海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库。方法：采用RNAiso Reagent(TAKARA)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。利用SMART(Switching Mechanismat5’end of RNA Transcript)技术,用Powerscript^TM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400^TM柱分级分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coliDH5α,建成原始文库。然后扩增文库并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小。结果：经鉴定,库容量达到1.9×10^6克隆,原始文库滴度为1.59×10^10cfu/mL,重组率接近100%,扩增后的文库滴度为7.4×10^12cfu/mL。插入片段大小分布为0.5～2.0kb,平均长度约为1.0kb。结论：所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础。