利用SMART技术构建新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA文库

编号 zgly0001376323

文献类型 期刊论文

文献题名 利用SMART技术构建新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA文库

作者 吴茜  田可川  刘武军  张艳花  吴伟伟  徐新明  张廷虎  马晓燕  黄锡霞 

作者单位 新疆农业大学动物科学学院  新疆畜牧科学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S826.89 

关键词 新吉细毛羊  皮肤组织  cDNA文库  SMART技术 

文摘内容 【目的】探寻控制羊毛性状的相关基因,构建了新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA文库。【方法】采用Clontech公司的CreaterTM SMARTTM cDNA library construction kit,用Biozol试剂提取新吉细毛羊皮肤组织总RNA后,以反转录酶SuperscriptTMⅡ反转录为第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA,扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMA SPIN-400柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB(带有SfiⅠA和B 2个位点)质粒载体中,最后用热击转化法将重组质粒转化到E.coliDH5α内,得到新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA原始文库,扩增后的文库分装后用50 mL离心管保存。【结果】构建的cDNA文库约含4.2×105个独立克隆,重组效率为100%,插入片段多为0.5~3.0 kb,平均插入片段长度为1.3 kb,符合建库要求。【结论】经检测所构建的文库库容量满足基因筛选要求,可用于特异表达基因全长序列。