中华大蟾蜍精巢组织全长cDNA文库的构建及泛素延伸蛋白基因Bg-ubi52的获得

编号 zgly0000521659

文献类型 期刊论文

文献题名 中华大蟾蜍精巢组织全长cDNA文库的构建及泛素延伸蛋白基因Bg-ubi52的获得

作者 陈文  郑萍萍  聂刘旺 

作者单位 安徽师范大学生命科学学院 

母体文献 动物学杂志 

年卷期 2007,42(1)

页码 20-28

年份 2007 

分类号 Q952 

关键词 中华大蟾蜍  精巢  cDNA文库  SMART技术  泛素延伸蛋白基因 

文摘内容 运用SMART技术构建了中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)精巢全长cDNA文库。提取中华大蟾蜍精巢总RNA，用Clontech公司SMART^TM cDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA，LD-PCR扩增获得全长cDNA双链；经SfiⅠ酶切、层析柱分离后，500bp以上的片段与λTriplEx2载体连接并包装，建成原始文库。经鉴定，原始文库滴度为2．21×10^6pfu／ml，重组率为91％；文库扩增后的滴度为2．94×10^9pfu／ml，重组率为93．7％。插入片段大小分布于0．4～2．0kb之间，平均长度约为1．0kb，说明已构建文库质量较高，为进一步筛选、克隆精巢特异表达基因奠定了基础。从该文库中克隆到了泛素延伸蛋白基因，全长561bp，包含完整的5′和3′非编码区，编码128个氨基酸，即泛素的76个氨基酸后融合了52个氮基酸的核糖体L40蛋白。