松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

编号 zgly0001445730

文献类型 期刊论文

文献题名 松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作者 林世锋  简恒  赵海娟  卜祥霞  刘倩 

作者单位 贵州省烟草科学研究院  中国农业大学植物病理学系农业部植物病理学重点实验室 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2013年02期

年份 2013 

分类号 S763.3 

关键词 松材线虫  类毒过敏原蛋白  基因优化  原核表达  多克隆抗体 

文摘内容 利用重叠延伸PCR基因合成法,按大肠杆菌偏爱密码子,合成松材线虫类毒过敏原蛋白基因(Bxvap2),将其连接到原核表达载体pET-29b(+)上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以可溶形式高效表达,占细菌总蛋白的33.5%。将表达产物经Ni-NTA亲和柱纯化后进行质谱分析,结果显示纯化的蛋白为BXVAP2蛋白。用制备的BXVAP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测得抗体灵敏度5.4 ng.mL-1(效价为1∶1 360 000),为进一步研究该蛋白的组织定位及功能,明确该基因在致病过程中的作用机理奠定了基础。