烟草PR1a基因启动子的克隆及其活性检测

编号 zgly0001412422

文献类型 期刊论文

文献题名 烟草PR1a基因启动子的克隆及其活性检测

作者 王云鹏  韦正乙  邢少辰  林春晶  王丕武 

作者单位 吉林农业大学生命科学学院  吉林省农业科学院生物技术研究中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年05期

年份 2011 

分类号 S572  Q943.2 

关键词 烟草  病程相关蛋白1a启动子  水杨酸  绿色荧光蛋白 

文摘内容 【目的】从烟草中克隆得到病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,并对其进行活性检测。【方法】通过PCR方法,从烟草基因组中克隆病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,构建该启动子驱动的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p3300-PR1aP-GFP,并用农杆菌介导法将其导入烟草,检测转基因烟草植株经水杨酸(SA)诱导前后GFP的表达水平,通过SDS-PAGE和ELISA对其在不同诱导条件下GFP的表达情况进行分析。【结果】序列分析表明,PR1aP的长度为1 320 bp,含已报道序列的全部顺式作用元件,如水杨酸相关的W-box、ACGT序列等,也有增强子as-a-like元件及CAAT、TATA等常见应答元件。PCR检测结果显示,成功地获得了转基因植株;荧光检测表明,启动子PR1aP在正常条件下不表现活性,而在水杨酸诱导下有GFP表达。SDS-PAGE和ELISA分析结果表明,当水杨酸诱导时间为72 h、质量浓度为0.25 mg/L时,GFP表达量达到最大值,GFP最高占到总可溶性蛋白的0.083%,产率最高可达15μg/g。【结论】烟草病程相关蛋白1a的启动子PR1aP具有水杨酸诱导性。