家蚕磷酸吡哆醇氧化酶的体外定点突变及其活性鉴定

编号 zgly0001399364

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕磷酸吡哆醇氧化酶的体外定点突变及其活性鉴定

作者 童宁  张剑韵  黄龙全 

作者单位 安徽农业大学茶与食品科技学院  安徽农业大学生命科学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2011年11期

年份 2011 

分类号 Q78 

关键词 家蚕  磷酸吡哆醇氧化酶  定点突变  基因表达  蛋白纯化  酶活性 

文摘内容 【目的】研究家蚕Bombyx mori磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine5’-phosphate oxidase,PNPO)个别保守氨基酸残基对PNPO酶活性的影响。【方法】用重叠延伸法把氨基酸残基Lys111(AAA)突变为Glu(GAA),Ser160(AGC)定点突变为Ala(GCC);构建重组表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta中诱导表达,经亲和纯化后进行酶活鉴定。【结果】重组蛋白的分子量约为45.0kDa。体外酶活分析发现,家蚕氨基酸残基Lys111突变体K111E活性降低了约78.0%,Ser160突变体S160A的活性降低了67.4%。【结论】结果提示氨基酸残基Lys111和Ser160对维持家蚕PNPO的酶活性有重要作用。本研究明确了家蚕磷酸吡哆醇氧化酶个别保守氨基酸残基的酶学功能。