正交设计优化果梅ISSR反应体系

编号 zgly0001357193

文献类型 期刊论文

文献题名 正交设计优化果梅ISSR反应体系

作者 桂腾琴  孙敏  乔爱民  王心燕 

作者单位 黔西南民族师范高等专科学校化学生物系  西南大学生命科学学院  三峡库区生态环境教育部重点实验室  仲恺农业技术学院农业与园林学院 

母体文献 果树学报 

年卷期 2009年01期

年份 2009 

分类号 S662.4 

关键词 果梅  简单序列重复区间(ISSR)  正交设计  反应体系 

文摘内容 以果梅(PrunusmumeSieb.etZucc.)品种鸳鸯梅为试材,采用改良的CTAB法提取果梅嫩叶DNA,利用正交设计L16(45)探讨Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量对果梅ISSR-PCR反应的影响,正交试验的结果采用直观分析和方差分析相结合。建立了果梅的ISSR-PCR优化反应体系,在20μL反应体系中含2μL10×Buffer,2.5mmol·L-1Mg2+,0.2mmol·L-1dNTPs,0.32μmol·L-1引物,20~80ng模板DNA,0.75UTaqDNA聚合酶。在此基础上探讨了引物UBC840的最适退火温度、最佳循环次数及延伸时间,引物UBC840的最适退火温度为50.6℃。应用该优化反应体系,用2个不同引物对19份果梅资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的稳定性。