梅花鹿IGF-1的原核表达与纯化

编号 zgly0000807357

文献类型 期刊论文

文献题名 梅花鹿IGF-1的原核表达与纯化

作者 孟星宇  李婷  李沐  刘宁  田玉华  胡薇 

作者单位 吉林农业大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(7)

页码 7-13

年份 2012 

分类号 S825 Q786 

关键词 梅花鹿  胰岛素样生长因子1  原核表达  蛋白纯化  生物学活性 

文摘内容 【目的】:克隆梅花鹿(Cervus nippon)胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)的成熟肽基因,并对其进行原核表达及纯化,以获得具有生物学活性的蛋白,为研究IGF-1在梅花鹿鹿茸生长发育中的调控作用及机理提供参考。【方法】:以GenBank中的梅花鹿IGF-1基因序列(登录号: HQ890468)设计1对引物,以构建的梅花鹿pMD-18T-IGF-1重组质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽的基因序列,构建重组质粒pMD-IGF-1,将其插入pET-32a表达载体后,构建pET-32a-IGF-1质粒,鉴定后,将pET-32a-IGF-1转入Rosetta大肠杆菌进行诱导表达(0.6mmol/L IPTG,37℃,4h)后,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。用Ni-Agarose柱亲和层析试剂盒分离、羟胺裂解纯化目标蛋白,并利用四唑盐比色法(MTT法)和流式细胞仪检测目标蛋白对NIH3T3细胞增殖及不同细胞周期下NIH3T3细胞比例的影响。【结果】:获得了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列(234bp);经鉴定,原核表达载体pET-32a-IGF-1构建成功;SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在Rosetta中成功诱导表达了融合蛋白,且羟胺裂解纯化后的目的蛋白纯度较高;MTT法和细胞周期检测结果表明,复性后的IGF-1重组蛋白能促进细胞增殖。【结论】:成功克隆了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列,获得了具有生物学活性的IGF-1蛋白。