gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响

编号 zgly0001657380

文献类型 期刊论文

文献题名 gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响

作者 余祖华  丁轲  郁川  贾艳艳  何雷  廖成水  李静  张梦珂  邱静静  张春杰  程相朝 

作者单位 河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室  洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室  河南科技大学宏翔生物饲料实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2019年02期

年份 2019 

分类号 S852.3 

关键词 gga-miRNA-155  表达载体  MDCC-MSB1细胞  细胞增殖 

文摘内容 【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155,并将其克隆入pMD-18T载体,构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155,将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接,构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中,应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测gga-mi-RNA-155的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,瞬时转染MD-CC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加,且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体,其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155,且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖。