EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究

编号 zgly0001697043

文献类型 期刊论文

文献题名 EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究

作者 栾兆进  宋慧子  杜炜  赵勇超  王兆琛  张家新 

作者单位 内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室内蒙古农业大学动物科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2020年05期

年份 2020 

分类号 S826 

关键词 表皮生长因子  附睾上皮细胞  绵羊  细胞增殖  叉头盒蛋白O1 

文摘内容 【目的】探讨表皮生长因子（EGF）对体外培养的绵羊附睾上皮细胞（EECs）增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18（CK18）对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5（GPX5）和雄激素受体（AR）基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P4代EECs分别用表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路抑制剂LY294002和DMSO（对照组）处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P4代EECs分别用EGF（-）、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1（FOXO1）磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高（P<0.01）,凋亡指数显著降低（P<0.05）。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低（P<0.01）,LY294002组S期细胞比例显著降低（P<0.05）;Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高（P<0.01）,而LY294002组EECs细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。