地衣芽胞杆菌HS10原生质电转化体系的研究

编号 zgly0001633700

文献类型 期刊论文

文献题名 地衣芽胞杆菌HS10原生质电转化体系的研究

作者 徐龙  黄文祥  刘红霞 

作者单位 南京农业大学植物保护学院 

母体文献 植物保护 

年卷期 2018年03期

年份 2018 

分类号 S476.1 

关键词 地衣芽胞杆菌  原生质体  电转化  质粒 

文摘内容 地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis HS10及其粗蛋白对多种病原真菌具有防治效果,为挖掘其生防功能基因,本研究通过对原生质体的制备、再生培养基、渗透压稳定剂、电击参数等试验条件进行优化,建立了地衣芽胞杆菌HS10原生质体电转化法。结果表明最佳转化条件为:转接培养10h达到对数生长后期的菌体,浓缩4倍后,利用终浓度1mg/mL的溶菌酶,于37℃、150r/min酶解20min,酶解效率达到99.34%,1×SMM洗涤3次,调整菌浓度至1.0×108 cfu/mL,并通过1.6kV、5ms的电击后,迅速在SMMP溶液中100r/min、37℃恢复6~10h,涂布于含Kan和Erm的再生培养基DM3平板。将该方法用于突变体库构建的质粒pMarA(8 253bp)和基因敲除质粒pMADΔCP(13 043bp)的大片段质粒转化,分别获得了37cfu/μg DNA和10cfu/μg DNA阳性转化子。该遗传转化体系为地衣芽胞杆菌HS10中相关基因功能的研究提供了技术支撑。