罗伊乳酸杆菌高效电转化方法的建立

编号 zgly0001411819

文献类型 期刊论文

文献题名 罗伊乳酸杆菌高效电转化方法的建立

作者 孙琳  胡雄兵  王磊  黄亚娟  杨明明  陈玉林 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年12期

年份 2011 

分类号 TS201.3 

关键词 电转化  乳酸杆菌  转化效率 

文摘内容 【目的】建立野生型罗伊乳酸杆菌的高效电转化方法,为乳酸杆菌工程菌的研究提供参考。【方法】采用醋酸锂(LiAc)和二硫苏糖醇(DTT)对不同浓度(0.5×109,1.0×109,2.5×109,5.0×109,10.0×109 mL-1)的罗伊乳酸杆菌分别预处理0,10,20,30min,制备罗伊乳酸杆菌感受态细胞,用于电转化,采用PCR和EcoRⅠ酶切鉴定阳性转化子,建立罗伊乳酸杆菌高效电转化方法。【结果】罗伊乳酸杆菌转化效率随LiAc和DTT处理时间的延长和细胞密度的升高而提高,在本试验条件下罗伊乳酸杆菌电转化的最佳菌体浓度为10.0×109 mL-1,LiAc和DTT的最佳处理时间为20min,在该条件下转化效率达(32.60±7.12)×107 cfu/μg,比未经LiAc和DTT处理的细胞转化效率高104倍以上。【结论】建立了罗伊乳酸杆菌高效电转化方法,电转化的最佳菌体浓度为10.0×109 mL-1,LiAc和DTT的最佳处理时间为20min。