蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)miRNA荧光定量体系的优化

编号 zgly0001577189

文献类型 期刊论文

文献题名 蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)miRNA荧光定量体系的优化

作者 赵安瑾  崔峥  杨文汉  李霆格  裴慧卿  王健 

作者单位 海南大学热带农林学院环南海陆域生物多样性研究中心 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2018年05期

年份 2018 

分类号 S682.31 

关键词 miRNA  实时荧光定量PCR  蝴蝶兰 

文摘内容 实时荧光定量PCR是目前验证基因表达量的首选方法之一,现也广泛应用于miRNA的表达量研究中,但在蝴蝶兰中尚未见报道。在实时荧光定量PCR检测miRNA体系中,cDNA模板浓度以及miRNA扩增引物长短和二级结构造成的退火温度的差异会直接影响PCR扩增效率,从而降低实验结果的可信度。针对该问题,本研究首次以蝴蝶兰miR858在花萼色斑与非色斑的差异表达为实例,通过对cDNA模板浓度以及退火温度的筛选,成功地优化了蝴蝶兰miRNA荧光定量体系。结果表明:蝴蝶兰miRNA858在退火温度65℃,与2μg RNA对应的模板cDNA进行10倍稀释后扩增结果最优。本研究为蝴蝶兰miRNA荧光定量PCR标准体系的构建提供了实验依据。