大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达

编号 zgly0000447209

文献类型 期刊论文

文献题名 大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达

作者 李振国  杨期东  毛诗贤  王改青  黄晓松 

作者单位 中南大学湘雅医院神经内科 

母体文献 中国临床康复 

年卷期 2006,10(2)

页码 85-87

年份 2006 

分类号 R742 

关键词 阿尔茨海默病  水解酶类  动物实验 

文摘内容 目的: 观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变。方法: 实验于2004-09/2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室(实验室B级)完成。选择青龄(2月龄)健康雌性SD大鼠10只, 老龄(20月龄)健康雌性SD大鼠10只。①反转录反应: 反应体系20μL, 取5μg(2μL)总RNA, 加1g/L Oligo(dT)18 0.5μL, 焦碳酸二乙酯处理过的水8.5μL, 70℃保持5min, 然后冰上骤冷30s, 短暂离心3～5s, 再加5×反转录buffer 4μL, 10mmol/L dNTPMix 2μL, 4U/μl Rnasin 0.5μL, 焦碳酸二乙酯处理过的水1.5μL, 轻轻混匀、离心3～5s, 37℃保持5min, 最后加200U/μL M-ulv反转录酶1μL, 42℃保持1h, 70℃保持10min变性, 冰上冷却10min, 反转录产物(cDNA)于-20℃保存备用。②聚合酶链反应: 总反应体系25μL, 包括10x聚合酶链反应buffer 2.5μL, 25mmol/L氯化镁1.5μL, 10mmol/L dNTP 1μL,2U/μL Taq酶0.5μL, 上述反转录产物cDNA 2μL, 50μmol/L上游目的引物0.5μL, 50μmol/L下游目的引物0.5μL,ddH2O 16.5μL。各程序均采用95℃5min预变性, 94℃, 45s、退火温度30s, 72℃ 1 min进行32个循环, 最后72℃延伸10min。退火温度, 去整合蛋白和金属蛋白水解酶10: 62.3℃; 去整合蛋白和金属蛋白水解酶17: 50.2℃; 肌动蛋白: 46℃。取聚合酶链反应产物5μL于15g/L琼脂糖凝胶电泳, 然后在凝胶图像处理系统上扫描, 测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值, 分别计算其比值, 即目的基因值: 目的基因吸光度值/肌动蛋白吸光度值。结果: 纳入动物20只, 均进入结果分析。①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平(1.2170±0.4308)低于青龄大鼠(1.5050±0.4958), 但两组比较差异无显著性(t=1.239, P〉0.05)。②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平(1.5720±0.5670)高于青龄大鼠(0.9740±0.3281), 但两组比较差异无显著性(t=-1.476, P〉0.05)。结论: 去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础。