柽柳类锌指基因ThZFL酵母诱饵表达载体的构建及其表达验证

编号 zgly0000734966

文献类型 期刊论文

文献题名 柽柳类锌指基因ThZFL酵母诱饵表达载体的构建及其表达验证

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 郑唐春  王英  臧丽娜  王亚军  曲冠证  夏德安 

作者单位 林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学)  嘉荫县林业局  林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学) 

母体文献 东北林业大学学报 

年卷期 2011,39(12)

页码 4-7,15

年份 2011 

分类号 Q784 Q939.5 

关键词 柽柳  ThZFL基因  酵母诱饵表达载体  自激活作用 

文摘内容 利用PCR技术从柽柳cDNA文库中克隆出ThZFL目的基因序列, 连接到pMD18-T载体, 转化大肠杆菌DH5仪感受态, 经检验后提取质粒, 用BamHI和眈oRI限制性内切酶双酶切pMD18-T—ThZFL载体和pG-BKT7-BD空载体, 并将酶切产物胶回收后, 用T4DNA连接酶连接过夜后转化大肠杆菌DH5d感受态获得目的基因转化子pGBKT7-ThZFL, 对转化子进行质粒PCR检验、质粒酶切检验、DNA测序鉴定。将测序检验正确的pG-BKT-/-ThZFL转化子, 转化酵母Y2Hgold菌株, 对转化后的酵母涂布SD/-Trp、SD/-Trp/X、DDO、TDO平板, 验证目的基因的自激活作用, 通过对酵母生长曲线的测量验证诱饵蛋白的毒性作用。试验结果表明: 用于筛选与ThZ-FL表达蛋白相互作用的靶蛋白的酵母诱饵载体构建成功, 重组诱饵载体pGBKT7-ThZFL对酵母自身没有毒害作用, 可以继续进行下一步的文库筛选工作。