柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4酵母双杂交诱饵质粒的构建与检测

编号 zgly0001517088

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4酵母双杂交诱饵质粒的构建与检测

作者 王自文  董辉  赵其平  夏伟丽  朱顺海  门启婓  李聪  朱雪龙  韩红玉  黄兵 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室  上海师范大学生命与环境科学学院  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2016年01期

年份 2016 

分类号 S852.7 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  钙依赖蛋白激酶  诱饵质粒  自激活作用  细胞毒性 

文摘内容 为了筛选出柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶(Et CDPK4)在虫体内发挥作用时的作用受体即相互作用蛋白,构建了能够应用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交c DNA文库的诱饵重组质粒p GBKT7-Et CDPK4,本研究以柔嫩艾美耳球虫子孢子为材料,提取了总RNA,经反转录得到c DNA第一链,利用PCR的方法扩增获得了该基因大小为1660 bp的Et CDPK4的功能区片段,并将其连接于酵母BD诱饵p GBKT7载体上,经双酶切鉴定和序列分析,以及检测了p GBKT7-Et CDPK4在酵母双杂交系统中的自激活、细胞毒性和表达情况。结果显示,成功构建了酵母双杂交诱饵重组质粒p GBKT7-Et CDPK4,在酵母双杂交系统中没有自激活活性和细胞毒性,且在酵母细胞Y2HGold中能够进行表达。表明所构建的诱饵质粒p GBKT7-Et CDPK4可以应用于酵母双杂交系统中,用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交c DNA文库,获得可能与Et CDPK4具有相互作用的蛋白质。