巴西橡胶树地上部地下部均一化酵母双杂交cDNA文库构建及评价

编号 zgly0001566178

文献类型 期刊论文

文献题名 巴西橡胶树地上部地下部均一化酵母双杂交cDNA文库构建及评价

作者 陈洪举  张浩  高乐  何鹏  韦家少  吴炳孙  张银东 

作者单位 海南大学农学院  中国热带农业科学院橡胶研究所 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2017年02期

年份 2017 

分类号 S794.1  Q943.2 

关键词 巴西橡胶树  地上部和地下部  酵母双杂交cDNA文库  均一化 

文摘内容 缺磷是影响橡胶树产量的主要因素之一,蛋白泛素化在其中发挥了重要作用。为研究泛素化在橡胶树低磷胁迫中的调控作用,本研究分别以巴西橡胶树热研7-33-97组培苗地上部和地下部为材料,构建酵母双杂交文库,并对其进行了评价。首先用CTAB法大量提取橡胶树地上部和地下部总RNA,再用PROMEGA试剂盒处理获得纯化的m RNA,然后采用SMART誖技术和LD-PCR合成双链cDNA(ds-cDNA),继而通过双链特异性核酸酶(DSN)对ds-cDNA进行均一化处理,再经CHROMA SPIN+TE-400柱子纯化长片段的cDNA,最后将获得的长片段cDNA和线性化载体p GADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞,构建均一化酵母双杂交文库。结果显示:地上部文库滴度8×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为100%;地下部文库滴度7×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为87%。该结果表明文库已成功构建,可以用于进一步实验。