巴西橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库构建

编号 zgly0001530919

文献类型 期刊论文

文献题名 巴西橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库构建

作者 余海洋  张宇  王萌  覃碧 

作者单位 海南大学环境与植物保护学院  中国热带农业科学院橡胶研究所 

母体文献 植物生理学报 

年卷期 2016年03期

年份 2016 

分类号 S794.1 

关键词 巴西橡胶树  胶乳  酵母双杂交cDNA文库  均一化 

文摘内容 以巴西橡胶树无性系‘热研7-33-97’胶乳为材料,采用SMARTcDNA合成技术反转录合成cDNA第一链,并通过LDPCR合成双链cDNA（ds-cDNA）,采用双链特异性核酸酶（DSN）对ds-cDNA进行均一化处理,并经过CHROMA SPIN+TE-400柱子去除短片段的cDNA,纯化后的cDNA和线性化载体p GADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞构建均一化酵母双杂交cDNA文库。结果显示:均一化之前橡胶树胶乳cDNA片段分布较广,丰度分布不均匀,经DSN均一化处理和CHROMA SPIN+TE-400柱纯化后,小于500 bp的片段得到有效去除,高丰度cDNA明显下降,而且RT-PCR扩增结果显示,均一化处理后,18S rRNA和β-actin两个管家基因的表达丰度均明显降低。最终获得初始文库的独立克隆为1.26×106 cfu,文库滴度达到3.23×107 cfu·mL-1,重组率为87%,平均插入片段大于1.0 kb。本研究构建了一个橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库,为进一步研究天然橡胶生物合成途径及其调控的分子机制提供借鉴。