里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达

编号 zgly0001305371

文献类型 期刊论文

文献题名 里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达

作者 张煜  刘刚  余少文  汤新  邢苗 

作者单位 深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室  深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室 深圳518060  深圳518060  深圳518060 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2005年03期

年份 2005 

分类号 Q819 

关键词 纤维素酶  整合表达  液质联用  羧甲基纤维素 

文摘内容 本工作采用巴氏毕赤酵母Pichiapastoris表达系统进行了里氏木霉Trichodermareesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表达。用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2。通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P.pastorisCBHⅡ1。在甲醇诱导的条件下培养P.pastorisCBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉。对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶。