一种适合蚊虫总RNA提取及样本保存的方法

编号 zgly0001693574

文献类型 期刊论文

文献题名 一种适合蚊虫总RNA提取及样本保存的方法

作者 黄文雨  卢莹  尹灿灿  马高风  刘啸  邵黄芳  李梦楠  孙恩涛 

作者单位 皖南医学院检验学院 

母体文献 应用昆虫学报 

年卷期 2019年06期

年份 2019 

分类号 Q963 

关键词 蚊虫  SDS法  改良SDS法  RNA提取  样本保存 

文摘内容 【目的】建立适合蚊虫总RNA提取的方法,探讨4种不同保存样本方法对蚊虫总RNA提取的影响。【方法】以室温、4℃冰箱、﹣20℃冰箱、﹣80℃冰箱4种不同方法保存蚊虫为研究对象,运用改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法分别提取蚊虫总RNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测提取RNA的质量,并比较提取效果。【结果】改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法提取蚊虫总RNA的浓度值分别为1.223 3±0.374 3、0.675 0±0.319 8、0.310 0±0.123 6,3种方法的浓度值差异具有统计学意义（F=14.767,P <0.001）。经LSD检验,改良SDS法提取蚊虫总RNA的浓度高于传统SDS法、TRIzol法（P=0.005、P <0.001）;改良SDS法提取的蚊虫总RNA纯度较高,A260/A280、A260/A230分别在1.8-2.0及2.0-2.2之间;电泳检测结果表明28 s、18 s及5.8 s条带清晰完整,条带之间无弥散,且无苯酚、蛋白质和gDNA污染;β-actin扩增显示符合RT-PCR的实验要求。在一个月内,﹣20℃、﹣80℃冰箱保存的蚊虫样本,其总RNA的提取未见明显降解。【结论】改良SDS法是一种经济便利、可提取高质量蚊虫RNA的方法。﹣20℃、﹣80℃冰箱在一个月内对蚊虫样本具有较好的保存效果。