猪传染性胸膜肺炎放线杆菌flic基因的克隆表达及生物信息学分析

编号 zgly0001373644

文献类型 期刊论文

文献题名 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌flic基因的克隆表达及生物信息学分析

作者 李任峰  田香勤  何启盖  王自良  赵坤  李学斌  王三虎 

作者单位 河南科技学院动物科学学院  新乡医学院医学研究中心  华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2009年10期

年份 2009 

分类号 S828.286.3 

关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌  flic基因  鞭毛蛋白  生物信息学 

文摘内容 【目的】构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,App)鞭毛蛋白(flic)编码基因的重组表达质粒,对其编码蛋白进行生物信息学分析,并将其在原核细胞中进行表达。【方法】利用PCR方法扩增flic基因片段,将其克隆至pMD-18T载体后测序,利用生物信息学软件对其编码蛋白的二级结构及跨膜区进行预测。构建重组表达质粒pGEX-flic,转化大肠杆菌工程菌BL21,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE及Western-blo对表达蛋白进行鉴定。【结果】获得的目的基因片段长度为528 bp,测序表明其序列与GenBank公布的一致;软件预测结果显示,该蛋白具有多个明显的二级结构成分及跨膜区;SDS-PAGE检测表明,在约50 ku处有一特异性条带;Western-blot检测表明,表达蛋白具有良好的抗原活性。【结论】成功获得了App的flic基因,其编码的蛋白质具有较多的α螺旋区和无规则卷曲区域,表达的鞭毛蛋白具有生物学活性。