含MDV gB CTL表位与鸡HSP108融和蛋白基因的构建及原核表达

编号 zgly0001373763

文献类型 期刊论文

文献题名 含MDV gB CTL表位与鸡HSP108融和蛋白基因的构建及原核表达

作者 邱亚峰  葛菲菲  曹瑞兵  周斌  马志永  陈溥言 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室  上海市动物疫病预防控制中心  南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2009年05期

年份 2009 

分类号 S852.65 

关键词 CTL表位  原核表达  融合蛋白基因  热休克蛋白 

文摘内容 【目的】为新型马立克氏病(MD)疫苗的开发奠定基础。【方法】以SPF鸡肝脏中提取RNA为模板,利用RT-PCR反应扩增鸡HSP108基因;利用PCR方法扩增MDV gB CTL表位基因,并将MDV gB CTL表位基因与鸡HSP108融合在一起,构建融合蛋白基因rgBHSP108,将该融合蛋白基因克隆入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-gBHSP108,将该重组载体转化E.coliBL21(DE3),并用IPTG诱导融合蛋白rgBHSP108的表达,对rgBHSP108进行SDS-PAGE电泳、可溶性分析、蛋白纯化及Western-blot分析。【结果】扩增到鸡2.4kb的HSP108基因和330bp的MDV gB CTL表位基因;克隆的鸡HSP108基因序列与GenBank上发表的鸡输卵管HSP108(NM204289)和来源于肝脏HSP108(AF387865)核苷酸的同源性分别为99.7%和99.0%。rgBHSP108融合蛋白基因构建成功;融合蛋白rgBHSP108以包涵体的形式获得高效表达并纯化。Western-blot分析表明,针对MDV gB CTL表位的多抗可以与融合蛋白发生特异性反应。【结论】成功构建了鸡HSP108融合蛋白基因,利用原核表达系统成功表达rgBHSP108。