表达miR-150shRNA细胞株的初步建立

编号 zgly0001362327

文献类型 期刊论文

文献题名 表达miR-150shRNA细胞株的初步建立

作者 代晨  邓文  张彦明 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2009年08期

年份 2009 

分类号 S852.65 

关键词 猪瘟病毒  miR-150  发夹RNA  转染 

文摘内容 为了探讨融合microRNA重组干扰载体构建的方法,为今后mi R-150对猪瘟病毒(CSFV)潜在的调控进行研究,利用生物信息学技术筛选出mi R-150,设计并合成了表达mi R-150的两条shRNA序列的DNA单链,将其退火后与干扰载体pGenesil-1连接,构建了含有mi R-150shRNA和绿色荧光蛋白基因的重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,提取并纯化质粒后,采用脂质体法将重组质粒转染PK-15细胞,用G418抗性筛选。经过酶切鉴定和测序鉴定,表明成功构建了重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,并在转染24 h后即可检测到绿色荧光。本研究成功得到稳定表达mi R-150的细胞株,所建的方法可以应用于各种microRNA的构建。