N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因的克隆与表达

编号 zgly0000651846

文献类型 期刊论文

文献题名 N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因的克隆与表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 杨蕴刘  饶娆  沈健  冯磊 

作者单位 中科院上海植物生理研究所  浙江医学高等专科学校 

母体文献 浙江大学学报: 医学版 

年卷期 2010(1)

页码 57-63

年份 2010 

分类号 Q55 

关键词 N-乙酰神经氨酸  遗传学  果糖-二磷酸醛缩酶  大肠杆菌  聚合酶链反应  克隆  分子  重组  遗传  转染  遗传载体  基因表达  重组蛋白质类 

文摘内容 目的: 为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌。方法: 以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),然后将nanA基因片段组入到pDR540载体的Ptac启动子下游,所得重组菌E.coliDH5α/pRY3的nanA基因在tac启动子控制下呈组成型表达。结果: DNA序列测定证明,该基因的开放阅读框(open read ing frame,ORF)大小为894 bp,编码298个氨基酸组成的酶蛋白;SDS-PAGE显示,纯化的目的蛋白为33 kD的单一条带。以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),在得到的转化子E.coliBL21(DE3)/pRY1中,nanA基因受lac启动子控制,无需IPTG或乳糖所诱导。在N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶固定化酶的催化下合成N-乙酰-D-神经氨酸的合成效率为78.3%,结晶回收率为90.2%,总回收率为70.6%。全波长扫描分析表明: 本实验室结晶品与Sigma公司商品的全波长扫描图谱有相同的特征。结论: 所构建的诱导型产酶菌株E.coliBL21(DE3)/pRY1和组成型表达菌株E.coliDH5α/pRY3都可较多量的产酶。合成的结晶品具有N-乙酰-D-神经氨酸的特征。