野桑蚕GST-Omega1基因在草地贪夜蛾Sf9细胞中的表达

编号 zgly0000521973

文献类型 期刊论文

文献题名 野桑蚕GST-Omega1基因在草地贪夜蛾Sf9细胞中的表达

学科分类 220.3020;森林昆虫学

作者 马晓英  李兵  贡成良  沈卫德 

作者单位 苏州大学生命科学学院  盐城工学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2007,50(10)

页码 996-1001

年份 2007 

分类号 Q966 

关键词 野桑蚕  谷胱甘肽S-转移酶基因  克隆  表达  杆状病毒表达系统  Sf9细胞 

文摘内容 谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是昆虫的重要解毒酶之一。为了研究野桑蚕Bombyxmandarina中谷胱甘肽S-转移酶在真核表达系统中的表达情况。本研究通过RT-PCR从野桑蚕中肠中获得GST-Omega1基因的cDNA序列,该基因的开放读码框为771bp,编码256个氨基酸。对推导的氨基酸序列用NCBI的蛋白质Conserved Domains工具进行在线分析,结果显示GST-Omega1的氨基酸序列中具有Cys^38和8个GSH结合位点的Omega类基因保守序列。对所获得的基因克隆进表达载体pFastBacHT b中获得pFast-GST-Omega1,将其转化DH10Bac感受态细胞,获得Bac-GST-Omega1重组病毒DNA,用脂质体法转染草地贪夜蛾Sf9细胞,获得重组病毒。对表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,能检测到一条分子量约为33kD的特异性条带,与推导的融合蛋白大小相符,该目的蛋白的表达量占总蛋白的14.4%。目的蛋白经His.Bind树脂纯化,用Lineweaver-Burk作图法测定其K和V,结果显示其K为2.81μmol/L,V为2.70μmol/(mg.min)。