猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达

编号 zgly0001686147

文献类型 期刊论文

文献题名 猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达

作者 于天飞  董慧莹  谢鹏宇  孙婉姝  尹海畅  黎明  于志丹 

作者单位 齐齐哈尔大学生命科学与农林学院  黑龙江省抗性基因工程与寒地生物多样性保护重点实验室  齐齐哈尔大学计算机与控制工程学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2020年01期

年份 2020 

分类号 S852.651 

关键词 猪传染性胃肠炎病毒  spike蛋白  亲和肽  原核表达 

文摘内容 【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV）spike蛋白亲和肽（SQHT）,检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该基因分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1中,构建重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,对重组质粒进行BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。将重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta（DE3）,用IPTG进行诱导表达,对其表达产物的生物学活性进行检测。【结果】亚克隆获得了150 bp的TGEV spike蛋白亲和肽基因。成功构建了重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,并诱导表达出重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT,其分子质量分别为25和31 ku。Western blot分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子具有良好的亲和性;Dot-ELISA分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子的最低结合滴度TCID50为5×102 mL-1。特异性试验表明,重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT均可与TGEV产生特异性结合,而不与猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪轮状病毒（PoRV）结合。【结论】使用原核细胞成功表达了TGEV spike蛋白亲和肽,表达的重组蛋白具有很好的TGEV特异亲和性。