利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得AtLCR67基因敲除突变体

编号 zgly0001566393

文献类型 期刊论文

文献题名 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得AtLCR67基因敲除突变体

作者 刘询  庞奥运  刘春林  阮颖 

作者单位 湖南农业大学生物科学技术学院  湖南农业大学农学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2017年06期

年份 2017 

分类号 Q943.2 

关键词 拟南芥  AtLCR67  CRISPR-Cas9  基因敲除  遗传转化 

文摘内容 拟南芥AtLCR67基因属于低分子量富含半胱氨酸(low-molecular-weight cysteine-rich,LCR)基因家族。在正常生长条件下,该基因在发育的种子中特异表达。为了研究该基因在发育或代谢过程中的可能作用,在没有合适T-DNA插入突变缺乏的情况下,我们利用CRISPR-Cas9定向敲除技术来创制该基因沉默的拟南芥突变体材料。通过构建AtLCR67基因的CRISPR-Cas9敲除质粒,借助农杆菌介导的浸花法转化野生型拟南芥Col-0,最终获得12株T0代转基因植株。对T0转基因植株的AtLCR67基因进行测序分析发现,在设计的靶位点处存在短片段缺失12个碱基和增加一个T碱基两种突变类型,进一步做RT-PCR检测分析发现突变体中AtLCR67基因完全不表达,说明成功获得拟南芥lcr67突变体。突变体材料的获得为进一步研究AtLCR67基因在发育或代谢方面的的功能奠定了良好基础。